酶的分離純化一般包括三個基本步驟：即抽提、純化、結晶或制劑。
首先將所需的酶從原料中引入溶液，此時不可避免地夾帶著一些雜質，然后再將此酶從溶液中選擇性地分離出來，或者從此溶液中選擇性地除去雜質，然后制成純化的酶制劑。
酶分離純化的最終目的是獲得單一純凈的酶，因此，容許在不破壞“目的酶”的限度內，使用各種手段;酶與底物和抑制劑的結合常使其理化性質和穩定性發生改變，這種特性已被用于酶的分離純化。
由于酶及其來源的多樣性及與之共存的高分子物質的復雜性，目前還很難找到一種通用的方法以適用于一切酶的純化。為了使一種酶達到高度純化，往往需要多種方法協同作用，通過酶活性的跟蹤檢測確定最佳流程。