1、吸光度
取本品，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1mL中含1.88mg的溶液，照紫外-可見分光光度法（通則0401）測定，在280nm與325nm的波長處，吸光度均不得大于0.10，在264nm的波長處有最大吸收，吸光度應為0.80~0.88。
2、有關物質
照高效液相色譜法（通則0512）測定，臨用新制。
供試品溶液：取本品適量，加水溶解并定量稀釋制成每1mL中約含4mg的溶液。
對照溶液：精密量取供試品溶液1mL，置100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。
系統適用性溶液：取青霉素系統適用性對照品適量，加水溶解并稀釋制成每1mL中約含4mg的溶液。
靈敏度溶液：精密量取對照溶液適量，用水定量稀釋制成每1mL中約含1.0μg的溶液。
色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀10.6g，加水至1000mL，用磷酸調節pH值至3.4）-甲醇（72:14）為流動相A，乙腈為流動相B，先以流動相A-流動相B（86.5:13.5）等度洗脫，待雜質E的第3個色譜峰（見參考圖譜）洗脫完畢后，立即按下表進行線性梯度洗脫，檢測波長為225nm，流速為每分鐘1.0mL，柱溫為34℃，進樣體積為20μL。
tg：青霉素系統適用性對照品溶液中雜質E的第3個色譜峰的保留時間。
系統適用性要求：系統適用性溶液色譜圖應與標準圖譜一致，靈敏度溶液色譜圖中，主成分色譜峰峰高的信噪比應大于10。
測定法：精密量取供試品溶液和對照溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
限度：供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積（1.0%），小于靈敏度溶液主峰面積的峰忽略不計。
3、青霉素聚合物
照分子排阻色譜法（通則0514）測定，臨用新制。
供試品溶液：取本品約0.4g，精密稱定，置10mL量瓶中，加水適量使溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻。
對照溶液：取青霉素對照品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1mL中約含0.1mg的溶液。
系統適用性溶液（1）：取藍色葡聚糖2000適量，加水溶解并稀釋制成每1mL中約含0.1mg的溶液。
系統適用性溶液（2）：取青霉素鉀約0.4g，置10mL量瓶中，加0.05mg/mL的藍色葡聚糖2000溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻。
色譜條件：用葡聚糖凝膠G-10（40~120μm）為填充劑，玻璃柱內徑為1.0~1.4cm，柱長為30~40cm，以pH7.0的0.1mol/L磷酸鹽緩沖液[0.1mol/L磷酸氫二鈉溶液-0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液（61:39）]為流動相A，以水為流動相B，流速為每分鐘1.5mL，檢測波長為254nm，進樣體積為100~200μL。
系統適用性要求：系統適用性溶液 (1) 分別在以流動相A 與流動相 B 為流動相記錄的色譜圖中 ， 按藍色葡聚糖2000 峰計算，理論板數均不低于 400 , 拖尾因子均應小于 z. 0, 藍色葡聚糖 2000 的保留時間的比值應在 0. 93 -1.07 之間。系統適用性溶液 (2) 在以流動相 A 為流動相記錄的色譜圖中，高聚體的峰高與單體和高聚體之間的谷高比應大于 2.0 。對照溶液色譜圖中主峰與供試品溶液色譜圖中聚合物峰，與相應色譜系統中藍色葡聚糖 2000 峰的保留時間的比值均應在0.93~1.07之間。以流動相B為流動相，精密量取對照溶液連續進樣5次，峰面積的相對標準偏差應不大于5.0%。
測定法：以流動相A為流動相，精密量取供試品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以流動相B為流動相，精密量取對照溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
限度：按外標法以青霉素峰面積計算，青霉素聚合物的量不得過0.08%。
4、可見異物
取本品5份，每份各0.625g，加微粒檢查用水溶解，依法檢查（通則0904），應符合規定。（供無菌分裝用）
5、不溶性微粒
取本品，加微粒檢查用水制成每1mL中含50mg的溶液，依法檢查（通則0903），每1g樣品中，含10μm及10μm以上的微粒不得過6000粒，含25μm及25μm以上的微粒不得過600粒。（供無菌分裝用）
結晶性、酸堿度、溶液的澄清度與顏色、干燥失重、細菌內毒素（供注射用）與無菌（供無菌分裝用）
照青霉素鈉項下的方法檢查，均應符合規定。