關于酶聯免疫吸附試驗的效果測定介紹

　　酶聯免疫吸附試驗測定內容包括酶和抗體活性、結合物中酶含量和IgG含量、酶與IgG摩爾比值以及結合率。

　　⑴ 酶聯免疫吸附試驗— 酶與抗體的活性

　　常用瓊脂擴散或免疫電泳法，使抗原與抗體形成沉淀線，經PBS漂洗1天，再以蒸餾水浸泡1小時，將瓊脂凝膠片浸于酶底物溶液中著色，如果出現應有的顏色反應，再用生理鹽水浸泡，顏色仍然不褪，表示結合物既有酶的活性，也有抗體活性。良好的結合物在顯色后，瓊擴滴度應在1:16以上。另一個測定方法是用系列稀釋的酶標抗體直接以ELISA方法進行方陣滴定，此法不僅可以測定標記效果，還可以確定酶標抗體的使用濃度。

　　⑵ 酶聯免疫吸附試驗— 結合物的定量測定

　　一般是對結合物中的酶和IgG進行定量測定。常用紫外分光光度計于403nm和280nm進行測定，然后按下列公式計算：

　　酶量（mg/ml）=OD403×0.42

　　IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.4）×0.94×0.62

　　對于過碘酸鈉氧化法制備的標記抗體量，按下列公式計算：

　　IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.34）×0.62

　　已知酶量和IgG量后，即可計算出標記抗體的摩爾（mol）比值。

　　HRP/IgG摩爾比值=HRP（mg/ml）/IgG（mg/ml）×4

　　結合物中酶總量=HRP（mg/ml）×結合物溶液量

　　結合物產率=結合物中酶總量/標記時加入的酶量×100%

　　用于ELISA的結合物的酶量為400(g/ml時效果一般，為500(g/ml時效果較好，達 1000(g/ml時效果最好。mol.比值由于結合物中含的IgG并不完全可靠，所以不能作為主要參數。一般認為mol.比值為0.7時效果一般，1.0時效果較好，1.5-2.0時最好。酶結合率為 7%時效果一般，為9%－10%較好，達30%以上時最好。

　　ELISA方法的基本類型、用途及操作程序

　　根據ELISA所用的固相載體而區分為三大類型：一是采用聚苯乙烯微量板為載體的ELISA，即我們通常所指的ELISA（微量板ELISA）；另一類是用硝酸纖維膜為載體的ELISA，稱為斑點ELISA（Dot-ELISA）；再一類是采用疏水性聚脂布作為載體的ELISA，稱為布ELISA（C－ELISA）。在微量板ELISA中，又根據其性質不同分為間接ELISA、雙抗體夾心ELISA、雙夾心ELISA、競爭ELISA、阻斷ELISA及抗體捕捉ELISA。