免疫組化非特異性染色及控制方法

一、非特異性染色的識別

常出現在組織邊緣、膠原纖維及血漿滲出處，壞死組織及固定不良的組織中心處。表現為彌漫性，均勻性的背景染色。也可以是隨機分布的陽性反應產物點、團或塊狀。

二、非特異性染色的原因

1. Ig與Fc受體結合

多見于冰凍切片（特別是淋巴造血組織，淋巴細胞，單核細胞，組織細胞表面多），主要是和二抗反應，因為一抗一般稀釋度均較大，因此Fc受體的干擾基本不存在。由于福爾馬林固定破壞了大部分的Fc受體，所以石蠟切片不多見。

避免方法：

（1）用以二抗相同種族的正常血清封閉切片；

（2）用不含Fc段的抗體，但價格貴。（V區，C1區不含Fc段，用Pepsin消化）

2. 靜電吸附

抗體是一種帶負電荷的球蛋白，容易和帶正電荷的組織相結合，如膠原纖維。

避免方法：

（1）盡量稀釋一抗；

（2）降低抗體的電荷，如用2.5%NaCl，0.05mTBS代替PBS；

（3）用去垢劑如triton-100，Tween-20等處理切片。

3. 二抗與組織中的Ig結合

如羊抗兔的二抗，二抗可以標本中（人）Ig發生交叉反應，科學上越接近的動物，交叉反應越明顯，如人與猴，兔與豚鼠。

避免方法：用與待測組織相同的5%的正常血清稀釋二抗。如人血清。

4. 組織中殘存醛基與Ig的結合

如醛類固定后未能徹底的沖洗，殘留醛基可以和Ig結合。

避免方法：

（1）徹底沖洗；

（2）0.02%的新鮮的硼氧化鉀液處理10分鐘后沖洗。

5. 內源性過氧化物酶

紅細胞，粒細胞的含量尤其高，鏡下可以識別，不要將其當成陽性結果。

避免方法：

（1）石蠟切片 0.3%雙氧水-甲醇溶液處理切片；

（2）冰凍切片 3%雙氧水處理切片5分鐘（99:1）因為未經固定包埋，大部分酶未被破壞；

（3）對于骨髓涂片 最好用非過氧化物酶標記的抗體

6. 內源性生物素

以 24mg/ml的卵白素封片15分鐘。

7. 交叉反應

PcAb敏感性高，但特異性稍低，容易出現非特異性染色。

避免方法：

（1）盡可能稀釋抗體；

（2）盡可能用McAb。