光學顯微鏡的樣品要求是什么？

在光學顯微鏡的樣品制備過程中，樣品的切片厚度在2～25um之間；電鏡的切片厚度在50-100nm以內（高壓電鏡除外，其樣品厚度可達到1um），所以采用的切片方法，也不盡相同。

在載體方面，光學顯微鏡的的切片的載體是玻片，而電鏡切片的載體是載網。

在固定方面，光學顯微鏡的切片使用復合固定液固定，而電鏡切片，只用單一固定液進行重復固定

在染色方面，光學樣品的染色較為簡單，根據不同的觀測樣品及光學顯微鏡的類型，通常以固定的一些染色劑染色就行了。而電鏡樣品再染色方面的方法很多，而且也很復雜，比如負染色、銀染色等等。

在包埋方面，光學顯微鏡切片使用石蠟、火棉膠、明膠等做包埋劑；電鏡切片則用環氧樹脂、聚苯乙烯樹脂、異丁烯樹脂及水溶性樹脂等做包埋劑。

為了使顯微鏡的視野能受到均勻而又充分的照明，在顯微鏡初次安裝和調試時，就必須把照明光路系統調整好，這是正確使用顯微鏡，并獲得正確、可*結果的重要手段和最基本的要求。此外，正確掌握照明光路系統的調整，是使用顯微鏡過程中更換光源燈泡后所必經的步驟，也是在日常使用過程中不時地檢驗顯微鏡性能的必要手段。顯微鏡照明光路系統的調整主要有以下4項內容：1．照明光源燈室在顯微外的初步調整① 首先將燈室的外殼打開，壓彈簧夾子將鹵素燈泡裝入插座中，安裝時避免手指直接接觸燈泡（可用柔軟的布或紙隔住），以免燈泡上留有指紋等臟物，影響燈泡的使用壽命。②把燈室擺在桌面上，接通電源后，用專用的螺絲刀調節燈的調焦旋鈕孔（標有“←→”），使燈絲投影在1-2m外的墻上，將燈絲成像調至清晰；然后調節燈的高低位置調節絲孔（標有“──”），使燈絲位置高低適當；再調節燈的左右位置調節螺絲孔（標有“──”），使燈絲左右位置合適。

2．光源發光體（燈絲）在顯微鏡內位置的檢驗和校正　目的是為了把發光體的像端端正正地調入物鏡的視域范圍內，從光源的角度去確保顯微鏡的視域受到充分而均勻的照明，這是調整庫勒照明系統的前提條件。需要的基本工具：對中望遠鏡購置顯微鏡時已配備。① 拔掉燈庫內的毛玻璃套筒，把燈室裝回顯微鏡上②選用10×物鏡，開亮光源程序找樣品并調焦清晰，再換用40×物鏡把樣品調焦清晰（40×物鏡可以看清燈絲的全貌）；③把聚光鏡的孔徑光闌和視場光闌均開到最大；④拔掉其中一個目鏡，換上對中望遠鏡，抓住白色部分，另一手伸縮黑色接目鏡，就可在視野中看到燈絲像；⑤如燈絲位置不合適，調“──”孔，把燈絲像沿水平方向調好，調“──”孔，把絲像沿垂直方向調好，直至將燈絲像調至剛好充滿物鏡孔徑的光圓像；⑥調整完畢后，將毛玻璃套筒插回原位，拔掉對中望遠鏡，換回目鏡作下一步調整。以上所述照明光源燈室在顯微鏡外的調整和光源發光體在顯微鏡內位置的校驗，只需在顯微鏡初次安裝調試及更換燈泡時進行，平時使用顯微鏡時不能隨意亂調亂動。萬一調亂時，可按上述步驟調回原狀。

3．庫勒照明（Kohler）系統的正確調整　顯微鏡的正確調試，主要工作之一是照明光路系統的調整，而其中的關鍵是庫勒照明系統的調整。對于每一位使用顯微鏡的人員，特別是作顯微照像的人員來說，應該對庫勒照明系統的原理及其調整步驟有一定的了解和掌握，才能充分發揮顯微鏡應有的功能，拍出來的照片才能在效果上比較一致而又完善。庫勒照明系統的原理簡單來說就是：光源發光體上任意一點發出的光，可以照明顯微鏡的視域范圍，而光源發光體上每一點所發出的光匯集起來，在顯微鏡的視域中就實現了非常充分而又均勻的照明。調整庫勒照明系統的目的，是為了使所觀察的視域能獲得均勻而又充分的照明，防止雜散光對照像系統造成影響或干擾，以免照像時在底片形成灰霧。高調整庫勒照明系統的必要部件：視場光闌、可進行合軸調整的聚光鏡系統。① 選用10×物鏡和10×目鏡② 把聚光鏡前端透鏡擺進光路中，孔徑光闌調至適中的位置上（不大不小），再把聚光鏡升到最頂的位置上，聚光鏡轉盤調至明視野“J”位置③ 把視場光闌調至最小（0.1）

④ 載物臺上放上已封片的生物樣品，開亮光源，調焦清晰

⑤ 視域中會出現一個局部照明的區域或亮斑，這是視場光闌的模糊像，在其中可以清晰地看到樣品的細節；在它之外是較暗的視域，不一定能把樣品的細節看得清楚

⑥把聚光鏡微微地向下調，使視野中的亮斑逐漸收小，慢慢變成一個清晰的多邊形象，這便是視場光闌的清晰像；

⑦一般情況下，多邊形象并不在視域中央，需要調整聚光鏡的一對調中螺絲，把視場光闌多邊形的像調至中央位置；

⑧逐漸開大視場光闌，使多邊形象成為視域的內接多邊形，進一步核對調中的狀況，如對中不夠理想，繼續微微調對中螺絲；

⑨將視場光闌稍為再微微開大一些，使它的多邊形象恰好消失在視域的邊緣上，至此，庫勒照明系統調整完畢。庫勒照明系統調整好以后，整個視域照明均勻，拍攝的顯微照片明亮清晰，反差正常。