β內酰胺酶的檢測

臨床標本中分離金黃色葡萄球菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌以及最近發現的腸球菌屬少數菌株對青霉素、氨芐青霉素出現耐藥。由于上述菌株產生 β-內酰胺酶水解前述抗生素。檢測該酶有下列方法：

(一)微生物活性消失法

此法是以一株對青霉素高度敏感的枯草芽胞桿菌的指示菌，如待檢菌株產生β內酰胺酶，破壞了青霉素，則在劃線兩邊有枯草芽胞菌生長，否則指示菌仍呈很大抑菌環。具體操作結果解釋參照《微生物學和微生物學檢驗》第115頁，劉恭植主編，人民衛生出版社，1988年。

(二)淀粉-碘測定法

β內酰胺酶破壞β內酰胺環，碘與被打開β內酰胺環結合，使藍色的淀粉-碘復合物轉變成無色。

方法：用pH6.0磷酸緩沖液配制青霉素懸液 6000μg/ml，取該液0.1 ml置于微量稀釋板凹孔中，挑選檢測菌株數個菌落混懸于其中，搖動30min，靜置室溫中1h，加淀粉液2滴，再加碘液1滴，混合，立即觀察顏色變化，陽性者當加入碘液后，首先立即出現藍色、如在10min內消失藍色，提示該菌產生β-內酰胺酶。

(三)酸測量法

青霉素被β-內酶胺酶水解后成青霉素酸，pH值下降6.8以下，用酚紅指示劑，由紅(紫)色 (原液：枸櫞酸緩沖液pH8.5) → 黃色(pH6.8以下)。

(四)頭孢硝基噻吩顯色反應

頭孢硝基噻吩(Nitrocefin)的β-內酰胺環被β-內酰胺酶打開，基質由黃色變成紅色。

液體方法：10mg頭孢硝基噻吩溶解于lml的二甲基亞砜中，然后用0.1mol/L PBS(pH7.0)再稀釋 1：20，最后濃度為500μg／m1，溶液呈黃或淡橙色，保存4～10℃，可用幾個星期。

取該溶液0.05ml置放于微量稀釋板凹孔中或小試管中，挑取被試菌落，制成濃厚懸液，與凹孔中基質液混和，室溫10～ 30min，頭孢硝基噻吩由黃變成紅色為陽性，若顯色不明顯，觀察可延長6h。

有報道紙片法用于流感嗜血桿菌和淋病奈瑟菌檢測β-內酰胺酶的結果是準確的，但對于某些菌株產生少量而與菌細胞緊密結合的β-內酰胺酶，如腐生葡萄球菌等，用液體法檢測更好。上述任何一種檢測方法都應用質量控制。